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雙向電泳的樣品的制備及電泳實(shí)驗(yàn)步驟

樣品制備原則樣品制備是雙向電泳中最關(guān)鍵的一步，將直接影響2-DE結(jié)果好壞。目前并沒有一個(gè)通用的樣品制備方法，盡管處理方法多種多樣，但都遵循幾個(gè)基本的原則：1）盡可能的提高樣品蛋白的溶解度，抽提最大量的總蛋白，減少蛋白質(zhì)的損失；2）減少對(duì)蛋白質(zhì)的人為修飾；3）破壞蛋白質(zhì)與其他生物大分子的相互作用，并使蛋白質(zhì)處于變性狀態(tài)。根據(jù)這一原則，樣品制備需要四種主要的試劑：離液劑(chaotropes),主要包括尿素（Urea）和硫脲（thiourea）；表面活性劑（sufactants）...

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免疫熒光標(biāo)記法

免疫熒光標(biāo)記法1、細(xì)胞膜上的免疫熒光檢測(cè)法間接標(biāo)記法1)制備單細(xì)胞懸液；2)細(xì)胞計(jì)數(shù)，取出1×106個(gè)細(xì)胞于試管中；3)用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)活細(xì)胞數(shù)，要求活細(xì)胞數(shù)90～95%；4)在試管中加入一抗，（劑量按照說明書的要求），孵育30～60分鐘；5)PBS洗滌1～2次，1500rpm，離心3分鐘，棄上清；6)加入二抗，孵育20～30分鐘；7)PBS洗一次，1500rpm，離心3分鐘，棄上清;8)加300μlPBS，上機(jī)檢測(cè)(若不能及時(shí)上機(jī)檢測(cè)，可加1ml1%多聚甲醛固定，可放置1周)...

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細(xì)胞凋亡檢測(cè)及分子生物學(xué)檢測(cè)步驟

細(xì)胞凋亡檢測(cè)及分子生物學(xué)檢測(cè)步驟：1、細(xì)胞DNA含量分布（由細(xì)胞DNA降解方式檢測(cè)細(xì)胞凋亡）收集已固定的單細(xì)胞懸液約5×105~1×106/ml；離心除去固定液，3mlPBS重懸細(xì)胞;使用低速離心機(jī)1500rpm離心，5分鐘，棄去PBS；加PI染液1ml，室溫避光20分鐘；調(diào)整細(xì)胞濃度5×105/ml；上機(jī)檢測(cè)。2、磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測(cè)細(xì)胞凋亡1)常規(guī)制備單細(xì)胞懸液,用PBS洗兩次.(若為全血要先溶血),取約5×106個(gè)細(xì)胞，1500rpm離心,棄上清,用400μl1×B...

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瓊脂糖核酸電泳介紹

瓊脂糖核酸電泳步驟1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈，放在制膠平板上，封閉模具邊緣，架好梳子；2.根據(jù)欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內(nèi)，定量加入電泳緩沖液（一般20~30ml）；3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固；4.室溫下30~45分鐘后凝膠全凝結(jié)，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內(nèi)；5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面1m...

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細(xì)胞培養(yǎng)板孔徑對(duì)細(xì)胞生長的影響

細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的重要環(huán)節(jié)。而細(xì)胞培養(yǎng)板是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的容器，它的孔徑大小對(duì)于細(xì)胞的生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響。本文將從細(xì)胞培養(yǎng)板孔徑大小對(duì)細(xì)胞生長、細(xì)胞通氣和細(xì)胞遷移的影響進(jìn)行介紹。一、細(xì)胞培養(yǎng)板孔徑大小對(duì)細(xì)胞生長的影響細(xì)胞培養(yǎng)板的孔徑大小對(duì)細(xì)胞的生長是有影響的。孔徑較小的細(xì)胞培養(yǎng)板通常具有較高的背景阻抗，對(duì)細(xì)胞形態(tài)和分子表達(dá)的影響較小，比如Tanswell細(xì)胞小室適合于長時(shí)間培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)。而孔徑較大的細(xì)胞培養(yǎng)板則通常具有較低的背景阻抗，對(duì)細(xì)胞形態(tài)和分...

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