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熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案

熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案無Ct值或Ct值延遲出現(xiàn):擴(kuò)增曲線信號不佳，曲線不平滑:標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差。1.擴(kuò)增產(chǎn)物大小不合適：實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增片段的長度通常在80-150bp之間，如果調(diào)整反應(yīng)的時(shí)間有可能擴(kuò)增500bp的片段。2.PCR反應(yīng)過程中退火及延伸的時(shí)間過短或過長：應(yīng)根據(jù)擴(kuò)增片段的大小予與調(diào)整。3.MgCl,濃度不合適：按0.5mm的間距調(diào)整MgCI2的濃度。4.循環(huán)數(shù)設(shè)置不足：最少設(shè)置35個(gè)循環(huán)，可以增加到45個(gè)循環(huán)。超過45個(gè)循環(huán)以上背景信號會(huì)增...

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消毒和滅菌的區(qū)別

微生物行業(yè)及微生物實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常會(huì)用到消毒、滅菌和清潔那么清潔、消毒和滅菌的區(qū)別是什么呢？滅菌滅菌的定義是破壞或消除所有形式的微生物生命的過程，并通過物理或化學(xué)方法在設(shè)施中進(jìn)行。加壓蒸汽、干熱、EtO氣體、過氧化氫氣體等離子體和液體化學(xué)品是醫(yī)學(xué)環(huán)境設(shè)施中使用的主要消毒劑。其實(shí)滅菌和消毒是有區(qū)別的，一些衛(wèi)生專業(yè)人員以及技術(shù)和商業(yè)文獻(xiàn)將“消毒”稱為“滅菌”，將物品稱為“部分無菌”。當(dāng)化學(xué)品被用來破壞所有形式的微生物生命時(shí)，它們可以被稱為化學(xué)消毒劑。這些用于較短暴露時(shí)間的相同殺菌劑也可...

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季銨鹽類消毒劑是什么

季銨鹽類消毒劑是什么？季銨化合物廣泛用作消毒劑。季銨鹽是較好的清潔劑，但高硬度的水和棉和紗布墊等材料會(huì)使它們的殺菌性降低，因?yàn)椴蝗苄猿恋砦锘蛎薏己图啿級|分別吸收了活性成分。季銨化合物與其他幾種消毒劑（例如酚類物質(zhì)、碘伏）一樣，革蘭氏陰性菌可以在其中存活或生長。季銨化合物消毒劑的化學(xué)性質(zhì)在化學(xué)上，季銨鹽是有機(jī)取代的銨化合物，其中氮原子的化合價(jià)為5，其中四個(gè)取代基(R1-R4)是給定大小或鏈長的烷基或雜環(huán)基，第五個(gè)(X-)是鹵化物、硫酸鹽或類似的自由基.每種化合物都表現(xiàn)出自己的抗...

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過氧化氫消毒液的應(yīng)用

過氧化氫消毒液的消毒原理：過氧化氫的作用是產(chǎn)生破壞性的羥基自由基，這些自由基可以攻擊膜脂、DNA和其他基本細(xì)胞成分。由具有細(xì)胞色素系統(tǒng)的需氧生物和兼性厭氧菌產(chǎn)生的過氧化氫酶可以通過將過氧化氫降解為水和氧氣來保護(hù)細(xì)胞免受代謝產(chǎn)生的過氧化氫的影響。過氧化氫消毒液的滅菌活性：過氧化氫對多種微生物具有活性，包括細(xì)菌、酵母菌、真菌、病毒和孢子。0.5%的加速過氧化氫在1分鐘內(nèi)表現(xiàn)出殺菌和殺病毒活性，在5分鐘內(nèi)表現(xiàn)出殺分枝桿菌和殺真菌活性。尿液中過氧化氫的殺菌效果和穩(wěn)定性已被證明可對抗多...

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細(xì)胞傳代的步驟-貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)步驟

傳代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一，也是幾乎所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋，分種成多瓶，細(xì)胞才能繼續(xù)生長。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)所需。傳代要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行，每一步都需要認(rèn)真仔細(xì)的無菌操作。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。本實(shí)驗(yàn)以傳代大鼠骨髓充間質(zhì)干細(xì)胞為例進(jìn)行細(xì)胞傳代的步驟做一介紹。一、傳代前準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)開始前，將無菌培養(yǎng)瓶、15ml離心管、移液管、槍頭等放入無菌超凈工作臺，紫外線照射30mi...

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